Le diagnostic fait appel à la recherche et la mise en évidence des microfilaires sanguicoles, ou de microfilaires in situ lors de biopsies cutanées.
Plus rarement, les filaires adultes peuvent être retrouvées dans leur localisation sous-cutanées.

1. Examen de sang périphérique pour mise en évidence de microfilaires sanguicoles

Examen direct d'une goutte de sang frais (photo)

Méthode simple mais avec une faible sensibilité. L'échantillon doit impérativement être examiné avant coagulation, ou prélevé sur anticoagulant.

Mode opératoire

Déposer sur une lame une goutte de sang après ponction des capillaires cutanés.
L'observer immédiatement au microscope entre lame et lamelle. Les microfilaires sont repérées au milieu des hématies grâce à leur mouvements ondulatoires.

Etalement sanguin

Méthode très simple et utilisable en diagnostic de routine. Elle manque de sensibilité du fait de l'absence de concentration. Néanmoins, elle respecte bien les structures des parasites.

Mode opératoire

Déposer sur une lame une petite goutte de sang après ponction des capillaires cutanés.
Etaler la goutte à l'aide d'une lamelle le plus finement possible et sécher.
Effectuer une coloration (exemple : May-Grünwald-Giemsa)
Examiner au microscope la queue du frottis, plus riche en parasites.

Goutte épaisse

Méthode très simple mais dont les résultats ne sont observables que 24 heures après. Elle permet une certaine concentration des parasites.

Mode opératoire

Prélever une grosse goutte de sang par ponction des capillaires cutanés.
Déposer la goutte sur une lame en lui imprimant des mouvements circulaires à l'aide de l'extrémité de la pipette ou d'un coin de lamelle. Ne pas étaler.
Laisser sécher 12 heures à l'abri de la poussière.
Déposer une goutte d'eau distillée et laisser agir 20 minutes (hémolyse). Sécher.
Effectuer une coloration (May-Grünwald-Giemsa) puis observer au microscope.

2. Examen de sang veineux (après enrichissement)

Sédimentation (technique de KNOTT modifiée) (photo)

Cette méthode permet d'obtenir de bonnes préparations microscopiques, avec une sensibilité optimale.

Mode opératoire

Prélever du sang par ponction veineuse.
Dans un tube à essai, mélanger 1 ml de sang à 9 ml de Teepol 10% (hémolyse).
Laisser reposer 12 à 24 heures ou centrifuger 10 min. à 2000 t/min.
Prélever une grosse goutte du culot de sédimentation.(Technique de la goutte épaisse.)
Déposer la goutte sur une lame en lui imprimant des mouvements circulaires à l'aide de l'extrémité de la pipette. Ne pas étaler.
Laisser sécher 12 heures à l'abri de la poussière.
Déposer sur la goutte séchée de l'eau distillée et laisser agir 20 minutes (hémolyse). Sécher.
Effectuer une coloration (May-Grünwald-Giemsa) puis observer au microscope.

Filtration sur membrane (Kits du commerce) (photo)

Ex : Difil-test kit
Cette méthode a été la plus usitée. Elle allie la fiabilité, la rapidité et la facilité de sa mise en œuvre, mais nécessite de posséder des filtres adéquats.

Mode opératoire

Prélever 1 ml de sang.
Aspirer, dans la même seringue, 9 ml d'une solution hémolysante (10% Teepol, 90% sérum physiologique ; ou formol à 2%). Agiter.
Adapter le porte-filtre, muni d'une nouvelle membrane, sur l'embout de la seringue.
Chasser le contenu de la seringue au travers du filtre.
Rincer la seringue à l'eau distillée et en chasser le liquide au travers du filtre.
Démonter le filtre, récupérer la membrane et la déposer sur une lamelle.
Verser deux gouttes de colorant, recouvrir d'une lamelle. A l'aide d'une gaze, essuyer l'excès de colorant sur les bords de la lamelle.
Observer au microscope.